Klonowanie i ekspresja mutacji wykazujących wewnątrzgenową komplementację w mutacji 10-metylomalonowej.

Mutacja mut0 prowadząca do niedoboru apoenzymu metylmalonylo-CoA (MCM) i kwaśności metylmaloniowej charakteryzuje się niewykrywalną aktywnością enzymatyczną w ekstraktach komórkowych i niską inkorporacją propionianu do hodowanych komórek, która nie jest stymulowana hydroksykobalaminą. Mut0 linii komórkowej fibroblastów (WG1681) z afro-amerykańskiego samca niemowlęcia uzupełnia inną linię komórek mut0 (WG 1130). Klonowanie i sekwencjonowanie cDNA z WG 1681 wykazało złożoną heterozygotyczność dla dwóch nowych zmian w wysoce konserwatywnych miejscach: G623R i G703R. Ponadto znaleziono dwa poprzednio opisane homozygotyczne polimorfizmy, H532R i V671I. Hybrydyzacja swoistych dla allelu oligonukleotydów do amplifikowanych przez PCR egzonów z probandu i członków rodziny zidentyfikowała klinicznie prawidłową matkę, pół-siostrę i przyrodniego brata jako nośniki zmiany G703R w cis z obydwoma polimorfizmami. Transfekcja każdej zmiany do linii komórek mut0 z bardzo niskim mRNA MCM (GM1673) wykazała brak stymulacji wychwytu propionianu przy nieobecności i obecności hydroksykobalaminy. Kotransfekcja każdej mutacji z wcześniej zidentyfikowaną mutacją R93H WG 1130 stymulowała wychwyt propionianu, wskazując, że G623R i G703R są niezależnie zdolne do komplementacji mutacji R93H.
[przypisy: grzybica prącia zdjęcia, guzek na powiece, grudki perliste usuwanie ]