Propagacja ludzkiego herpeswirusa z mięsaka Kaposiego powiązanego z AIDS

Listy Foreman i in. (Wydanie z 16 stycznia) donosi o propagacji herpeswirusa związanego z mięsakiem Kaposiego (KSHV) z linii komórkowych mięsaka Kaposiego, wykorzystujących komórki linii komórek nabłonkowych nerek ludzkich jako cele do infekcji. W trzech eksperymentach próbowaliśmy rozmnożyć KSHV bezpośrednio z guzów Kaposiego poprzez hodowlę świeżej, drobno zmielonej tkanki z 293 komórkami, z których część została nam uprzejmie podana przez grupę University of Michigan, a niektóre z nich zostały zakupione z American Tissue Culture Collection (ATCC), Rockville, Maryland.
W ciągu dwóch do trzech dni kokultury komórki 293 z grupy Michigan wykazywały znaczną utratę przylegania, agregację do dużych skupisk oraz ogniskowe dowody na balonowanie i degenerację (identyczne ze zmianami opisanymi przez Foreman i wsp.1), podczas gdy współzultury zawierające 293 komórek z ATCC nie wykazywało dużych zmian morfologicznych. Gdy supernatanty z rażąco dotkniętych współhodowli przepuszczono przez filtr 0,45 .m i dodano do nowych hodowli 293 komórek (z grupy Michigan), indukowano podobne zmiany morfologiczne. W ten sposób potwierdzamy, że istnieje filtrowalny i zakaźny środek pochodzący z tkanki mięsaka Kaposiego, który był zdolny do wywoływania wyraźnej cytotoksyczności w określonej podgrupie 293 komórek. Jednakże jest znacznie mniej oczywiste dla nas, że te efekty cytotoksyczne są spowodowane bezpośrednią infekcją KSHV.
Aby wesprzeć naszą pozycję, stosując zagnieżdżoną reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) w celu wykrycia DNA KSHV (z niższą granicą wykrywania 10 kopii), 2 nie udało się wykryć trwałego DNA KSHV w hodowlach 293 komórek, które wykazały poważne zmiany morfologiczne. Co więcej, 293 komórek, które zbijają się i tworzące gigantyczne komórki, nie wykazywały żadnych herpeswirusów ani innych potencjalnych patogenów, gdy badaliśmy je w dużym stopniu za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej.
Ryc. 1. Ryc. 1. Niepokute Nucleocapsids w cytoplazmie komórki wrzeciona w mięsaku Kaposiego ze śledziony pacjenta z AIDS. Nukleokapsydy mają gęste jądra, z których niektóre nabywają koperty po wkrapleniu w cysterny (strzałki). W wyniku PCR stwierdzono, że ta zmiana zawiera DNA KSHV, ale nie wirus Epsteina-Barr ani DNA cytomegalowirusa (octan uranylu i cytrynian ołowiu, × 105 000).
Podobnie, wierzymy w dowody uzyskane przez mikroskopię świetlną i transmisyjną mikroskopię elektronową, że Foreman i in. obecny w przypadku zakażenia komórek 293 przez KSHV jest bezpodstawny. Zmiany chromatyny cytowane w skrajnym prawym panelu na rysunku 1B ich artykułu nie są typowe dla zakażenia wirusem z grupy opryszczki . Białe strzałki wskazują jądra przypominające te w komórkach kontrolnych, które pokazują zmiany, które może być wynikiem kariolizy, a nie cytotoksyczności wirusa opryszczki. Wewnątrzkomórkowe inkluzje, które są typowe dla infekcji herpeswirusami, nie są pokazane.
Przesłane cechy mikroskopii transmisyjnej pokazane na ich rysunku 5 są jeszcze bardziej problematyczne, ponieważ żadna z konstrukcji rzekomo reprezentujących wiriony KSHV nie ma klasycznych cech herpeswirusów, ponieważ widzieliśmy je za pomocą mikroskopii elektronowej w mięsaku Kaposiego (Figura 1) i jamie ciała Oparte na komórkach chłoniaka z limfocytów B.3. W szczególności ani rozmiar, ani cechy morfologiczne struktur pokazanych na fig. 5 nie są zgodne z rozmiarami wirusów opryszczki; sugerujemy, że przedstawione struktury mogą reprezentować pierwotne lizosomy Osłonięta cząsteczka wirusowa w Panelu E jest znacznie mniejsza niż cząstka otoczkowana w Panelu A i nukleokapsyd w Panelu C. Panel B pokazuje granulki perychromatyny z halo, powszechne nieswoiste ustalenie jądrowe, a nie nukleokapsydów. Podsumowując, chociaż Foreman i koledzy wykazują dobre dowody PCR na przejście KSHV w komórkach 293, mocno popieramy koncepcję (jak sugerują autorzy), że rozległa liza komórek nie jest spowodowana bezpośrednią infekcją KSHV.
Andrew Blauvelt, MD
National Cancer Institute, Bethesda, MD 20892-1908
Brian G. Herndier, Ph.D., MD
University of California, San Francisco, San Francisco, CA 94143
Dr med. Jan M. Orenstein
George Washington University, Washington, DC 20037
3 Referencje1. Foreman KE, Fribourg J Jr, Kong W, i in. Propagacja ludzkiego herpeswirusa z mięsaka Kaposiego związanego z AIDS. N Engl J Med 1997; 336: 163-171
Full Text Web of Science MedlineGoogle Scholar
2. Blauvelt A, Sei S, Cook PM, Schulz TF, Jeang KT. Infekcja ludzkim wirusem herpeswirusa 8 występuje po okresie dorastania w Stanach Zjednoczonych. J Infect Dis (w druku).
Google Scholar
3. Orenstein JM, Alkan S, Blauvelt A, i in. Wizualizacja ludzkiego herpeswirusa typu 8 w mięsakach Kaposiego za pomocą mikroskopii świetlnej i transmisyjnej. AIDS 1997; 11: F35-F45
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
Odpowiedź
Autorzy odpowiadają:
Do redakcji: Blauvelt i in. przedstawić kilka punktów technicznych związanych z propagacją ludzkiego herpeswirusa z mięsaka Kaposiego związanego z AIDS. Ich próba hodowania KSHV w komórkach 293 przy użyciu zmielonej tkanki mięsaka Kaposiego różni się znacznie od naszej metody, która obejmowała współhodowlę z wczesnymi pasażami linii komórek mięsaka Kaposiego hodowanych w określonych pożywkach.1 Podaje się, że współzakażenie linii mięsaka Kaposiego z 293 komórkami było niezbędne do rozmnażania wirusa in vitro.1 Podobnie jak Blauvelt i wsp., nie byliśmy w stanie rozmnażać wirusa ze świeżo zdysocjowanej tkanki, prawdopodobnie z powodu jego większej cytotoksyczności, ale możemy to zrobić łatwo w opisanych przez nas warunkach. Podgrupa 293 komórek, które opisaliśmy, lepiej wspiera replikację wirusa. Zostało ono udostępnione laboratoriom na życzenie i zostanie przekazane do Programu AIDS Research and Reference Reagent National Institutes of Health (Rockville, MD).
Cząstki w jądrach zainfekowanych komórek nie były pierwotnymi lizosomami. Chociaż inne struktury w jądrze można pomylić z wirusem, a ich tożsamości podlegają indywidualnej interpretacji, cząstki pokazane na naszej Figurze 5B wydają się najbardziej zgodne z wirusami opryszczki. Co więcej, w mikroskopie świetlnym, około 1% zainfekowanych komórek zawierało ciałka wewnątrzjądrowe dwa dni po infekcji i miało rozproszone zmiany jądrowe, również widoczne w mikroskopie elektronowym (nasza Figura 5), 1, które były typowe dla infekcji herpeswirusami.2 Rozprzestrzenianie się KSHV od zmian mięsaka Kaposiego w hodowli komórkowej zostało potwierdzone przez wiele niezależnych testów obejmujących amplifikację wirusowego DNA i wykrywanie wirusowego DNA w strukturach odpornych na trawienie nukleazami, a także przez mikroskopijne i komórkowe dowody jego rozprzestrzeniania się. Bez definitywnej charakterystyki można wykonane jedną metodą Próbka przedstawiona przez Blauvelta i in. nie analizowano pod kąte
[więcej w: nutrend, diltiazem, buprenorfina ]
[podobne: grudki chłonne w gardle, grudki perliste usuwanie, gruźliczak ]