Klonowanie i ekspresja mutacji wykazujących wewnątrzgenową komplementację w mutacji 10-metylomalonowej.

Mutacja mut0 prowadząca do niedoboru apoenzymu metylmalonylo-CoA (MCM) i kwaśności metylmaloniowej charakteryzuje się niewykrywalną aktywnością enzymatyczną w ekstraktach komórkowych i niską inkorporacją propionianu do hodowanych komórek, która nie jest stymulowana hydroksykobalaminą. Mut0 linii komórkowej fibroblastów (WG1681) z afro-amerykańskiego samca niemowlęcia uzupełnia inną linię komórek mut0 (WG 1130). Klonowanie i sekwencjonowanie cDNA z WG 1681 wykazało złożoną heterozygotyczność dla dwóch nowych zmian w wysoce konserwatywnych miejscach: G623R i G703R. Ponadto znaleziono dwa poprzednio opisane homozygotyczne polimorfizmy, H532R i V671I. Hybrydyzacja swoistych dla allelu oligonukleotydów do amplifikowanych przez PCR egzonów z probandu i członków rodziny zidentyfikowała klinicznie prawidłową matkę, pół-siostrę i przyrodniego brata jako nośniki zmiany G703R w cis z obydwoma polimorfizmami. Read more „Klonowanie i ekspresja mutacji wykazujących wewnątrzgenową komplementację w mutacji 10-metylomalonowej.”

Badanie interakcji ludzkiej krwi pępowinowej i dorosłych limfocytów z wytwarzaniem immunoglobulin in vitro.

Noworodki nie są w stanie wyprodukować prawidłowych ilości immunoglobulin pomimo obecności krążących limfocytów z powierzchnią immunoglobiny (Ig). Badanie to zostało zaprojektowane w celu zbadania komórkowej podstawy takiej upośledzonej syntezy Ig u noworodka. Zastosowano test in vitro dla syntezy IgG i IgM, który mierzył Ig obecne w supernatantach szkarłatnego stymulowanego mitogenem krwi pępowinowej i / lub dorosłych obwodowych jednojądrzastych komórek (MNC). Wyniki były następujące: (a) dodanie MNC z krwi pępowinowej do dorosłego MNC tłumiło zarówno normalną produkcję IgG, jak i IgM; (b) dodanie zawiesiny komórek pochodzących z grasicy dorosłej (T) do komórek pochodzących z szpiku kostnego (B) nie zwiększyło produkcji Ig; (c) dodanie komórek T w postaci pępowiny do dojrzałych limfocytów B nie zwiększyło normalnej produkcji Ig, ale znacząco obniżyło syntezę IgM i IgG; i (d) napromieniowanie komórek T w rdzeniu za pomocą 2000 rad usunięto efekt tłumienia komórek T w postaci pępowiny na dorosłym MNC. Podobne odwrócenie efektu supresyjnego wywieranego przez MNC w postaci kordu obserwowano również w obecności 10 mikroM hydrokortyzonu. Read more „Badanie interakcji ludzkiej krwi pępowinowej i dorosłych limfocytów z wytwarzaniem immunoglobulin in vitro.”

Doustne podawanie ludzkiej immunoglobuliny w surowicy u pacjentów z niedoborem odporności z wirusowym zapaleniem żołądka i jelit. Analiza farmakokinetyczna i funkcjonalna.

Zbadaliśmy farmakokinetykę i aktywność immunologiczną ludzkich immunoglobulin (HSG) surowicy wykazujących aktywność przeciwko wirusem rota, które podano doustnie trzem dzieciom z pierwotnymi zespołami niedoboru odporności i długotrwałym wydalaniem rotawirusa z przewodu pokarmowego. Szczegółowa analiza wydalania immunoglobulin znakowanych biotyną lub I125 ujawniła, że około 50% odzyskanej radioaktywności zostało wydalone w stolcach w okresie 3-d. Około połowa wydalanej radioaktywności odzyskanej w kale była w postaci makrocząsteczkowej z aktywnością immunologiczną. Pozostała część odzyskanej radioaktywności była wydalana z moczem w postaci fragmentów o niskiej masie cząsteczkowej lub wolnego jodku. Ponadto analizy immunologiczne i chromatograficzne ujawniły, że doustne podawanie HSG spowodowało wytworzenie swoistych dla rotawirusa kompleksów immunologicznych w przewodzie żołądkowo-jelitowym z późniejszym zmniejszeniem obecności nieskompleksowanego antygenu rotawirusa. Read more „Doustne podawanie ludzkiej immunoglobuliny w surowicy u pacjentów z niedoborem odporności z wirusowym zapaleniem żołądka i jelit. Analiza farmakokinetyczna i funkcjonalna.”